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| 產地 | 國內 |
| 品牌 | 上海滬崢 |
| 貨號 | HXG708 |
| 用途 | 僅用科研 |
| 包裝規格 | 50T/盒 |
| 是否進口 | 否 |
布尼亞病毒（BV）試劑盒（熒光-PCR法）為上海滬崢PCR主要產品之一，產品優勢 樣品種類多，質控嚴格，高特異性，供貨快，已被國內外廣大科研工作者使用，被稱謂：質量信得過產品
通用名稱：布尼亞病毒（BV）試劑盒（熒光-PCR法）
規格：50T/盒
英文名稱：BV Detection Kit (Real-Time PCR Method)
自備試劑：樣品 RNA
【檢驗原理】
本試劑盒對布尼亞病毒（BV）基因保守區設計特異性的引物和探針[1-3]，用熒光 PCR 技術對核酸進行體外擴增檢測，從而達到快速檢測之目的。
布尼亞病毒（BV）試劑盒（熒光-PCR法）試劑組成】
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名 稱 |
規 格 |
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酶液 |
50μL×1 管 |
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BV反應液 |
500μL×2 管 |
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BV陽性質控品 |
50μl ×1 管 |
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陰性質控品 |
250μl×1 管 |
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融不超過 5 次。有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
【標本采集】取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g。
【保存和運輸】上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃。但不能超過 6 個月，標本運送應采用 0℃冰代。【使用方法】樣品處理（樣本處理區）
1.1 樣本前處理：
取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g，手術剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續研磨，待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中， 8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。
2 DNA 提取
樣本 DNA 的提取采用 DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。
試劑配制（試劑準備區）
根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 10 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：
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試劑 |
BV反應液 |
酶液 |
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用量 |
20μL |
1μL |
將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL，加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。
PCR 擴增（核酸擴增區）
4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；
4.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25ul；熒光通道選擇： 檢測通道
（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請勿選擇 ROX 參比熒光。
4.3 推薦循環參數設置：
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步驟 |
循環數 |
溫度 |
時間 |
收集熒光信號 |
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1 |
1 cycle |
95℃ |
10min |
否 |
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2 |
40 cycles |
94℃ |
15sec |
否 |
|
55℃ |
30sec |
是 |
注意事項
：所有試劑使用前需完全解凍，混合均勻，6,000rpm離心數秒后使用。
1. 樣本處理（樣本處理區）
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等，具體提取方法請參照相關說明書；陽性質控品及陰性質控品無需提取，可直接使用。
2. 擴增試劑準備（PCR前準備區）
取N個（N=陰性質控品+待檢樣本+陽性質控品）PCR反應管，每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s，轉移至樣本處理區。
2.加樣（樣本處理區）
3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質控品和陽性質控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉移至擴增區。
