登革熱病毒2型(DFV-II)試劑盒(熒光-PCR法)為上海滬崢PCR主要產(chǎn)品之一，產(chǎn)品優(yōu)勢(shì) 樣品種類多，質(zhì)控嚴(yán)格，高特異性，供貨快，已被國(guó)內(nèi)外廣大科研工作者使用，被稱謂：質(zhì)量信得過(guò)產(chǎn)品
通用名稱：登革熱病毒2型(DFV-II)試劑盒(熒光-PCR法)

規(guī)格：50T/盒

英文名稱：RSV-B Detection Kit (Real-Time PCR Method)

自備試劑：樣品 RNA

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒對(duì)登革熱病毒2型(DFV-II)基因保守區(qū)設(shè)計(jì)特異性的引物和探針[1-3]，用熒光 PCR 技術(shù)對(duì)核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測(cè)，從而達(dá)到快速檢測(cè)之目的。

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融不超過(guò) 5 次。有效期 12 個(gè)月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測(cè)儀。

【標(biāo)本采集】取動(dòng)物組織及其制品、食品或飼料約 1g。

【保存和運(yùn)輸】上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃，長(zhǎng)期保存可置-70℃。但不能超過(guò) 6 個(gè)月，標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 0℃冰代。【使用方法】樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.

實(shí)驗(yàn)步驟：

一、 樣品RNA的抽提

二、 1. 取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。

三、 2. 兩相分離 每1 ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2 ml的氯仿，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12 000 rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯仿相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。

四、 3. RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12 000 rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。

五、 

六、 4. RNA清洗 移去上清液，每1 mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1 ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7 000 rpm離心5分鐘。

七、 

八、 5. RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。

九、 

十、 6. 溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。

主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

登革熱病毒2型(DFV-II)試劑盒(熒光-PCR法)【注意事項(xiàng)】

1. 每次使用，開(kāi)蓋之前請(qǐng)先瞬時(shí)離心，使試劑沉于管底。
2. 所有試劑在要求溫度下保存，盡量減少反復(fù)凍融，使用后的試劑應(yīng)立即放回。
3. 本試劑盒為10頭份量試劑，加樣和反應(yīng)程序嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，由于操作失誤、移液器不 、定時(shí)不準(zhǔn)確造成無(wú)結(jié)果情況，不予負(fù)責(zé)。
4. 吸頭、離心管和PCR管在使用前，應(yīng)高壓滅菌。
5. 注意防止試劑污染，在有效期限內(nèi)用完。