呼吸道合胞病毒A 型（RSV-A）試劑盒(熒光-PCR法)為上海滬崢PCR主要產品之一，產品優勢 樣品種類多，質控嚴格，高特異性，供貨快，已被國內外廣大科研工作者使用，被稱謂：質量信得過產品
通用名稱：呼吸道合胞病毒A 型（RSV-A）試劑盒(熒光-PCR法)

規格：50T/盒

英文名稱：HastV Detection Kit (Real-Time PCR Method)

自備試劑：樣品 RNA

【檢驗原理】

本試劑盒對呼吸道合胞病毒A 型（RSV-A）基因保守區設計特異性的引物和探針[1-3]，用熒光 PCR 技術對核酸進行體外擴增檢測，從而達到快速檢測之目的。

-20℃±5℃，避光保存、運輸、反復凍融不超過 5 次。有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、MJ Opticon2、LightCycler480、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【標本采集】取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g。

【保存和運輸】上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃。但不能超過 6 個月，標本運送應采用 0℃冰代。

1.1 樣本前處理：

取動物組織及其制品、食品或飼料約 1g，手術剪剪碎混勻后取 0.5g 于研磨器中研磨，加入 1.5mL 生理鹽水后繼續研磨，待勻漿后轉至 1.5mL 滅菌離心管中， 8000rpm 離心 2min，取上清液 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

2 DNA 提取

樣本 DNA 的提取采用 DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

試劑配制（試劑準備區）

根據待檢測樣本總數，設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照；樣品每滿 10 份，多配制 1 份)，每測試反應體系配制如下表：

將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL，加入相應的反應管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

PCR 擴增（核酸擴增區）

4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內；

4.2 設置好通道、樣品信息，反應體系設置為 25ul；熒光通道選擇： 檢測通道

（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，請勿選擇 ROX 參比熒光。

4.3 推薦循環參數設置：

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。

主要服務：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

呼吸道合胞病毒A 型（RSV-A）試劑盒(熒光-PCR法)【注意事項】

1. 每次使用，開蓋之前請先瞬時離心，使試劑沉于管底。
2. 所有試劑在要求溫度下保存，盡量減少反復凍融，使用后的試劑應立即放回。
3. 本試劑盒為10頭份量試劑，加樣和反應程序嚴格按照說明書進行，由于操作失誤、移液器不 、定時不準確造成無結果情況，不予負責。
4. 吸頭、離心管和PCR管在使用前，應高壓滅菌。
5. 注意防止試劑污染，在有效期限內用完。

PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°C左右）時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶最適反應溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。基于聚合酶制造的PCR儀實際就是一個溫控設備，能在變性溫度，復性溫度，延伸溫度之間很好地進行控制。

實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程， 通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。