肺-炎克雷伯氏菌肺-炎亞種(KP)試劑盒（熒光-PCR法）

規格：50T/盒

自備試劑：樣品 RNA

【檢驗原理】

本試劑盒對肺炎克雷伯氏菌肺炎亞種(KP)基因保守區設計特異性的引物和探針[1-3]，用熒光 PCR 技術對核酸進行體外擴增檢測，從而達到快速檢測之目的。

【儲存條件及有效期】

-20℃避光保存、運輸、避免反復凍融，有效期12個月。

【適用儀器】

ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀。
【保存和運輸】

上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃，但不能超過6個月，標本運送應采用0℃

肺-炎克雷伯氏菌肺-炎亞種(KP)試劑盒（熒光-PCR法）結果分析條件設定

設置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析，當曲線出現整體傾斜時，根據分析后圖像調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節)，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照)，重新分析結果。

判斷

陽性：檢測通道Ct值≤35，且曲線有明顯的指數增長曲線：

可疑：檢測通道35

   且曲線有明顯的增長曲線，判定為陽性，否則為陰性；

  陰性：樣本檢測結果Ct值＞38或無Ct值。

  6.質控標準

   陰性質控品：Ct值＞38或無Ct值顯示；

   陽性質控品：擴增曲線有明顯指數生長期，且Ct值≤32

  以上條件應同時滿足，否則實驗視為無效。

實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，*通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術可以對DNA、RNA樣品進行定量（包括*定量和相對定量）和定性分析。

主要服務：DNA或RNA的*定量分析、基因表達差異分析、基因分型。

主要技術：引物設計、RNA提取、cDNA合成、qPCR。

PCR反應五要素：

參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物： 引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。

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