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        上海滬崢生物科技有限公司
        產品展廳
        牛副流感病毒3型PCR檢測試劑盒
        • 品牌:上海滬崢
        • 產地:國內
        • 型號:50T/盒
        • 貨號:HXG549
        • 價格: ¥2380/盒
        • 發布日期: 2021-03-16
        • 更新日期: 2025-12-15
        產品詳請
        產地 國內
        品牌 上海滬崢
        貨號 HXG549
        用途 僅用科研
        包裝規格 50T/盒
        純度 詳詢客服%
        CAS編號
        是否進口

        檢驗原理】
        本試劑盒用牛副流感3型特異性引物,結合一條特異性探針,用熒光PCR技術對對牛副流感3型DNA進行體外擴增檢測,用于對可疑感染者的病原學診斷。
        【儲存條件及有效期】
        -20℃避光保存、運輸、避免反復凍融,有效期12個月。
        【適用儀器】
        ABI系列、MJ系列、Roche系列、博日系列及其他熒光定量PCR檢測儀。
        【保存和運輸】
        上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過6個月,標本運送應采用0℃冰壺。
        【使用方法】
        1. 樣品處理(樣本處理區)
        1.1 樣本前處理
        組織:取50mg左右組織用玻璃勻漿器勻漿,勻漿后置入潔凈的1.5ml離心管中;
        液體標本:取適量標本13000rpm離心2min,棄上清。
        1.2 DNA提取
        1) 對上述處理好的標本加入40ul 核酸提取液,100℃恒溫處理10分鐘,13,000 rpm離心5分鐘,取上清液轉移至新的1.5ml EP管,-20℃保存;
        2. 試劑配制(試劑準備區)
        根據代檢測樣本總數,設所需要的PCR反應管管數為N(N=樣本數+1
        管陰性對照+1管陽性對照),體系配制如下表:
        試劑
        WSSV 反應液
        酶液
        用量(樣本數為N)
        20μl
        1μl
        3. 加樣(樣本處理區)
        將步驟1提取的DNA、陽性質控品、陰性質控品各取4μl,加入相應的
        反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。
        4. PCR擴增(核酸擴增區)
        4.1 將待檢測反應管置于熒光定量PCR儀反應槽內;


        試劑盒準備物品:
        清理液(A)                                    毫升
        染色液(t B)                                  微升
        稀釋液(C)                                    毫升
        溶解液(tD)                                   毫升
        產品說明書                                       1份
        反應五要素:
        參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
        引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
        ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
        ②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
        ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
        ④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
        ⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數*個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
        ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
        ⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
        引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。






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