小鼠成纖維細胞來源于ATCC原代細胞，ATCC傳代細胞，sciencell細胞

原代凍存或復蘇培養，復蘇時間1-2周，保證細胞純度在98%以上，同時也需經過微生物檢測，保證不含有HIV、HBV、HCV、支原體、真菌及其他類型的細菌.   

細胞名稱 ： 小鼠成纖維細胞

簡稱:PA317                                                                  

組織來源：胚胎

培養條件：DMEM +10% FBS

形       態：貼壁；成纖維細胞樣

背       景：PA317細胞株源自TK- NIH/3T3細胞，通過pBR322中的包裝結構DNA(pPAM3)和pBR322中的單純皰疹病毒胸苷激酶基因共同轉染構建而成。 通過感染或轉染將逆轉錄病毒載體導入這些細胞，結果生成可以感染許多哺乳動物細胞的雙嗜性載體顆粒。 這株細胞生成的病毒顆粒已成功地用于將基因導入人類。 可能因為用于構建這株細胞而轉入的DNA丟失，能夠包裝逆轉錄病毒載體的PA317細胞百分比隨傳代而減少。 在包含0.03 mM 次黃嘌呤, 0.001 mM 氨甲喋呤和0.02 mM 胸苷的培養基中短暫(大約5天)選擇，可以選出保留了包裝功能的細胞。 選擇后，細胞應在HT培養基(0.03 mM 次黃嘌呤,0.02 mM 胸苷)中培養4天，以稀釋殘留的氨甲喋呤。

細胞數: 1×106cells

規格: 1ml/T25

運輸保存:采用干冰保存運輸

細胞用途：僅供科研使用

小鼠成纖維細胞培養操作規程僅供參考

準備好培養基及培養凍存條件及凍存液。

細胞處理

復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養

細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，先要消化處理并進行細胞計數。消化方法按照細胞傳代方法的1-3步驟進行，*的重懸液使用血清。懸浮細胞直接計數后離心，用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中。

小鼠成纖維細胞購買細胞注意事項：

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象發生請及時和我們聯系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態、所用培養基、血清比例、所需細胞因子等。

3. 用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于培養箱內靜置培養過夜，隔天再取出觀察。此時多數細胞均會貼壁，若細胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細胞活力，如果證實細胞活力正常，請將細胞離心后用新鮮培養基再次貼壁培養；如果染色結果顯示細胞無活力，請拍下照片及時和我們聯系，信息確認后我們為您再免費寄送一次。

4. 請客戶用相同條件的培養基用于細胞培養。培養瓶內多余的培養基可收集備用，細胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養基混合，使細胞逐漸適應培養條件.

6. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

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